微滴式数字PCR定量检测鸡毒支原体方法的建立

为建立微滴式数字PCR（droplet digital PCR,ddPCR）定量检测鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum,MG）方法,以MG的mgpc基因序列为目的序列,在其保守区域内设计合成了1对特异性引物和1条探针,通过各反应条件优化,建立了检测MG的ddPCR方法,并测定了建立方法的特异性、敏感性以及重复性。结果显示：建立方法的最佳引物浓度为20 μmol/μL,探针浓度为10 μmol/μL,退火温度为55 ℃;该方法只检出MG,没有检出鸡滑液囊支原体、禽衣阿华支原体、禽流感病毒、鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、禽脑脊髓炎病毒、禽偏肺炎病毒、禽呼肠孤病毒、鸡沙门氏菌和鸡大肠杆菌,且相互间没有交叉反应;本方法最低检测MG重组质粒标准品的检测限为3.9拷贝/μL。重组质粒标准品浓度在3.9~41 025拷贝/μL范围内,绘制的ddPCR绝对定量曲线与测得值呈良好的线性关系（R2 = 0.999）;3次重复检测试验结果的变异系数均小于5%。对采集的60份病鸡喉拭子、气囊拭子及肺样品进行MG检测,结果ddPCR方法的阳性检出率（15.0%）高于荧光定量PCR方法（13.3%）。结果表明,本研究建立的ddPCR方法定量检测MG特异性强,灵敏度高,重复性好,为绝对定量检测MG提供了技术手段。     

能量饲料原料在家禽日粮中的净能评定研究

准确评定饲料能量的有效能值是以最佳效率满足家禽的营养需要以及保证其良好的生产性能的关键。净能体系在代谢能体系的基础上考虑了热增耗的损失,在能量分配上更加全面,作为评定体系逐渐被推广,能量饲料原料作为家禽重要的日粮能量来源,提高其能值评定的准确性不仅有利于饲料配方的设计,还能降低生产成本、提高利润。因此,文章综述了家禽净能体系的构建及优势,及其在能量饲料原料上的应用研究进展。     

昆明犬IGF2基因克隆、生物信息学分析及其时空表达研究

【目的】 克隆昆明犬胰岛素样生长因子2（IGF2）基因并研究其序列特征及时空表达规律,为工作犬体型及生长发育相关研究提供基础资料。【方法】 采用PCR法扩增昆明犬IGF2基因CDS区,运用生物信息学分析预测昆明犬IGF2蛋白的结构与功能;利用实时荧光定量PCR技术检测IGF2基因在2.5月龄昆明犬心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及大腿内侧肌肉和不同年龄段肝脏中的表达情况。【结果】 昆明犬IGF2基因CDS区全长717 bp,编码238个氨基酸;系统进化树分析显示,昆明犬IGF2基因与赤狐的遗传距离最近,与鸡的遗传距离最远。生物信息学分析表明,IGF2蛋白分子质量为26.46 ku,理论等电点为9.61,无信号肽和跨膜结构,属于亲水性非分泌蛋白;主要分布于细胞核（47.8%）和线粒体（17.4%）,存在23个磷酸化位点;该蛋白的二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,三级结构与二级结构预测结果相符。组织表达谱分析显示,IGF2基因在2.5月龄昆明犬肝脏中相对表达量最高,且极显著高于肾脏、肺脏及肌肉组织（P<0.01）;仔犬期（2.5月龄）肝脏中的IGF2基因的表达量极显著高于幼犬期（6月龄）、青年期（1岁）及成年期（1.7和2.5岁）（P<0.01）。【结论】 本研究成功克隆昆明犬IGF2基因,并发现IGF2在多个组织广泛表达,在肝脏中的表达量最高,可为深入探讨昆明犬IGF2基因在生长发育中的调控机理提供参考。     

非洲猪瘟病原学检测技术研究进展

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染家猪和野猪而引起的一种急性烈性、高度接触性传染病,到目前为止仍未研制出有效疫苗,因此病原的早发现对ASF防控尤为重要。ASFV的病原学检测主要包括活病毒检测、核酸检测和抗原检测。活病毒检测中,病毒分离和红细胞吸附试验均耗时较长,且对实验室要求较高,通常只有被参考实验室采用。病毒核酸检测中,普通PCR和实时荧光定量PCR(qPCR)是OIE推荐的首选诊断方法,其特异性和灵敏度均较高,但操作复杂、成本高;等温扩增技术操作简单、成本低,不需要特殊仪器,检测时间短、携带方便、灵敏度高,适用于屠宰场、养殖场现场检测,但因特异性不高,需要不断更新和改进;微流控芯片法具有样品消耗少、检测速度快、操作简便、便于携带等优点,但检测成本高,需要特定的设备,尚未被广泛使用。抗原检测技术中,荧光抗体检测(FAT)对实验室要求较高,不适合现场检测;夹心ELISA和胶体金免疫试纸条检测快速,操作简单,检测成本低,但敏感性和特异性还需改进。ASF病原学检测技术虽很成熟,但各有不足,所以应根据实际情况结合使用。     

小型犬难产

随着国民经济的不断发展,人们生活水平的提高,城市禁养大型犬的呼声提高,家庭结构的小型化,饲养小型犬的人越来越多.由于小型犬具有体格小,产道狭窄,胎儿较多、有的胎儿较大等特点,导致发生难产机会增大.以下就难产发生的病因、症状、诊断、治疗和预防作一简单介绍.     

一起猪群腹泻暴发的回顾性研究

通过生产记录检索、问卷、座谈等方式,采集动物、畜舍、病史、发病过程等数据,对山东省X新建种猪场一起猪群腹泻暴发进行了回顾性研究。数据显示,该猪场此次暴发猪群腹泻可能是由于猪群感染TGE或PED病毒引起。定性分析表明,外来车辆进入可能是病毒进入该场的主要途径,工人和场内车辆的移动可能是疫情扩散的主要原因。及时给药能够在一定程度上降低发病率和病死率。建议该场以后加强管理,特别是厂区车辆和人员的管理,提高生物安全防护意识。     

村级动物防疫员激励保障机制的探索与思考

村级动物防疫队伍是我国基层动物疫病防控体系中极其重要的组成部分,是农村地区重大动物疫病防控的基本力量。但是,目前村级动物防疫员正面临待遇不高、工作环境艰苦、培训与需求失衡、养老保险缺失和后继乏人等现实困境。在新的动物疫病防控形势下,需要有完善的基层动物疫病防控体系,必须建立健全村级动物防疫员激励保障机制,引入培养机制稳定村级动物防疫队伍,提高村级动物防疫员的整体素质和水平,加大村级动物疫病防控的投入与管理力度,解决好村级动物防疫员的待遇及养老问题,努力筑牢我国农村地区动物防疫事业的基础性防线。     

广州亚运无规定马属动物疫病区公路动物防疫监督检查站的管理初探

从化公路动物防疫监督检查站具有维持无疫区无疫状态和保障广州亚运马术比赛顺利举办的双重属性,完善的管理能有效防控重大动物疫病的跨区域传播,切断其传播途径以达到某一时期内的区域净化。     

彝良县村级动物防疫工作中存在的问题及对策

兽医体制改革虽然已经完成,县、乡动物防疫体系巳得到相应的加强,但是村级动物防疫组织机构因基层财力不足未能建立有效的运行机制。因此村级动物防疫工作体系建设和管理仍然是彝良县兽医行政主管部门和动物防疫监督工作中急需探索和解决的重要课题。     

检测流感病毒的商业PCR试剂盒比对验证

利用8种不同流感病毒株及其核酸,结合自然感染组织样品与人工混合样,验证比较了8种商业PCR试剂盒的质量参数。结果表明,3号荧光PCR试剂盒漏检1株外,其他试剂盒均可以检测8种毒株,对其他类似病毒如猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪细小病毒和猪环状病毒核酸等无交叉反应,最高可检测到10-7稀释的目标核酸,重复性与再现性均为理想,在有效期内检测结果没有发生变化。